棄去封閉液，加入適量的一抗溶液，于搖床上輕輕震蕩1h。（也可將印跡膜與一抗在2-8°C條件下孵育過(guò)夜。）將印跡膜于洗脫液中懸浮清洗5min以上，并更換洗脫液4-6次。將印跡膜與適量的HRP-結(jié)合物置于搖床上輕輕震蕩，室溫孵育1h。重復(fù)步驟3以去除未結(jié)合的HRP-結(jié)合物.將A液和B液以1：1混合即得到超敏ECL化學(xué)發(fā)光工作液，推薦使用量為0.1mL/cm2。將工作液與印跡膜于室溫孵育5min。將膜從工作液中取出，并用吸水紙吸去多余的液體，置于兩層干凈的保鮮膜之間，小心擠出印跡膜與保鮮膜之間的氣泡。將印跡膜置于暗盒中，蛋白面朝上，于暗室中進(jìn)行X-光膠片曝光。建議曝光時(shí)間為60s，進(jìn)而通過(guò)調(diào)整曝光時(shí)間獲得較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  化學(xué)發(fā)光試劑,增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物能檢測(cè)抗體以及Western blot或ELISA標(biāo)簽中的HRP活性。

經(jīng)濟(jì)性與同類(lèi)化學(xué)發(fā)光底物相比花費(fèi)更少。pg級(jí)靈敏性,高靈敏性能快速檢測(cè)更廣泛的蛋白范圍。信號(hào)穩(wěn)定.發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)，能進(jìn)行多次曝光.信號(hào)強(qiáng).發(fā)光信號(hào)比普通的以魯米諾為基礎(chǔ)的HRP檢測(cè)體系強(qiáng)兩倍以上.工作液穩(wěn)定性高.工作液室溫穩(wěn)定存放8小時(shí)；試劑盒能在室溫下保存一年。節(jié)約抗體,需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗.校正曲線范圍廣.校正曲線的范圍從4.00–8000pg，R2為0.992。

   化學(xué)發(fā)光試劑注意事項(xiàng).勿將超敏ECL化學(xué)發(fā)光工作液暴露在陽(yáng)光或強(qiáng)光下，否則會(huì)導(dǎo)致其失活。建議將工作液保存在棕色瓶中，并避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在陽(yáng)光下，實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)工作液影響不大。使用生物素/親和素體系時(shí)，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因?yàn)槊撝谭壑泻卸喾N內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號(hào)。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤(rùn)狀態(tài)。使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號(hào)的產(chǎn)生。疊氮鈉是HRP酶的抑制劑，會(huì)對(duì)反應(yīng)體系產(chǎn)生干擾，因此緩沖液中應(yīng)避免使用疊氮鈉做為防腐劑。印跡膜與ECL化學(xué)發(fā)光工作液孵育后5-30min內(nèi)的發(fā)出的熒光是zui強(qiáng)的，隨后熒光會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)減弱。蛋白點(diǎn)熒光較弱時(shí)可以適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。更多相關(guān)知識(shí),請(qǐng)咨詢本公司.